一、基础信息
中文名称:A 链肽片段 (2091‑2108)
三字母序列:Cys-Ser-Arg-Ala-Arg-Lys-Gln-Ala-Ala-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-Ser-Ala-Asp-Arg
单字母序列:CSRARKQAASIKVAVSADR
氨基酸数量:18 个氨基酸,线性多肽,无末端酰胺化修饰;N 端游离氨基,C 端游离羧基。N 端含有半胱氨酸(Cys),自带游离巯基 (-SH),可发生二硫键形成。
分子式:C82H149N31O26S
分子量:2017.35 Da
等电点 pI:10.72,属于碱性多肽。
溶解性:水溶性较好,可溶于水、PBS 缓冲液;溶液偏中性 / 弱碱性条件下溶解度更高。该肽含有多个碱性残基 Arg、Lys,同时存在 Asp 酸性残基。
结构式:
二、结构特征与改造意义
该片段为大分子蛋白 A 链 2091–2108 位的天然序列片段,无环化,无 D 型氨基酸,无磷酸化、荧光标记等人工修饰。序列中包含大量 Ala(丙氨酸),Ala 富集区域易形成 α 螺旋倾向;Ile、Val 疏水残基集中在中段,提供疏水相互作用位点;N 端 Cys 是关键特征,游离巯基可用于与载体蛋白偶联、荧光标记、固定到固相载体,也会随存放自发氧化形成二硫键,造成肽聚集。 序列内富含碱性氨基酸(Arg、Lys),是蛋白上的带电结合区域,负责和其他蛋白、核酸或者细胞膜发生相互作用。
三、作用机理
作为蛋白 A 链的天然肽片段,该多肽保留了母蛋白该区段的分子识别位点,主要依靠静电相互作用、疏水作用实现分子结合。大量带正电的 Lys、Arg 残基,能够和带负电的生物大分子(磷脂、糖胺聚糖、核酸、蛋白酸性结构域)产生静电吸引;疏水残基 Ile、Val、Ala 参与疏水界面的识别与结合。N 端 Cys 的巯基可参与氧化还原介导的蛋白交联。 该肽本身一般不具备酶催化活性,主要作为结合结构域片段,用来模拟母蛋白这一段的相互作用,在体外体系中结合对应的受体 / 配体。
四、应用领域
蛋白 - 蛋白相互作用研究:用于体外 pull‑down、ELISA、SPR 表面等离子共振实验,验证母蛋白该区域和其相互作用分子的结合能力,定位关键结合位点。
0抗体开发与抗原制备:此片段可作为免疫抗原,制备靶向母蛋白 A 链 2091‑2108 区域的多克隆 / 单克隆抗体;N 端 Cys 可用于 KLH、BSA 载体偶联。
分子互作位点突变与构效关系(SAR)研究:单点突变序列中 Arg/Lys/Ala 等残基,研究每个氨基酸对结合活性的贡献,确定核心结合位点。
细胞水平结合实验:用于细胞孵育,检测多肽和细胞膜表面分子结合,考察细胞粘附、结合相关的功能。
质控对照肽:在母蛋白的生化检测实验中,用作阳性对照肽。
五、药物研发价值
该多肽本身只是蛋白片段,不是候选药物,不直接作为给药分子开发。它主要作为工具分子,用于解析大分子靶蛋白的结合界面,辅助药物靶点验证。 潜在限制:游离 Cys 易氧化聚集;多肽在体内易被肽酶水解,半衰期短,难以直接体内给药。如果后续开发成靶向药物先导物,一般需要做修饰(如 D 氨基酸替换、环化、PEG 修饰)提升稳定性。
六、研究进展
这类长蛋白片段肽是结构生物学与蛋白互作领域常用合成肽。科研上常直接固相合成该区段,代替全长大分子蛋白 —— 全长蛋白表达纯化难度高、分子量大,用短合成肽片段可以快速、低成本单独研究局部区域功能。 文献中这类片段多用于映射抗原表位,或者绘制蛋白相互作用图谱;很多研究通过截短、点突变该序列,缩小结合的最小基序范围。该序列的 Cys 是实验中重点关注位点,氧化是最常见的实验干扰因素。
七、理化特性与实验注意事项
含有游离巯基(Cys),极易氧化,配液、分装操作尽量在惰性气体(氮气)环境下更佳;水溶液中氧化会产生二硫键二聚体,出现沉淀,影响实验结果。
280nm 无明显紫外吸收(序列不含 Tyr、Trp),不能直接用 A280 测浓度,推荐使用 BCA、Bicinchoninic acid 法或者氨基酸定量来测定多肽浓度。
碱性多肽,在低 pH 缓冲体系溶解度会下降,尽量选用 pH7.0–8.0 中性缓冲液配制。
避免反复冻融,反复冻融将加速巯基氧化,产生聚合物。
溶液中可按需添加 DTT/TCEP 还原剂,抑制二硫键生成;但如果后续偶联标记,则不能添加还原剂。
八、储存规范
冻干粉末:-20℃密封避光长期保存;若存放时间超过半年,推荐 - 80℃,干燥保存,防潮。
多肽水溶液:使用前现配,快速分装成小体积,-80℃保存;尽量减少冻融次数。水溶液室温放置稳定性差,巯基氧化随时间快速增加。